Bagaimana untuk mengurangkan masa elektroforesis asid nukleik kepada 10 minit?

Elektroforesis Asid Nukleik selalunya lebih perlahan daripada yang sepatutnya – mencuri masa, gel terlalu panas, dan menangguhkan keputusan dalam makmal yang sibuk.

Kesakitan: Mengapa Gel Mengambil Masa Terlalu Lama

Kebanyakan pasukan menerima larian 30 – 60 minit sebagai "biasa." Tetapi jangka panjang menyembunyikan kos sebenar. Haba terkumpul, jalur kabur, dan anda kehilangan masa antara PCR dan langkah seterusnya. Penampan TAE/TBE klasik tidak direka untuk kelajuan pada kekuatan medan yang lebih tinggi. Tolak voltan dan gel memanaskan; tolak lebih lama dan anda berisiko penghijrahan yang diputarbelitkan atau pemulihan yang lemah. Menjalankan semula gel untuk membetulkan kos sapuan lebih daripada beberapa minit – ia mengurangkan keyakinan dan menyumbat aliran kerja anda.

Daripada perbualan dengan pelanggan, kami mendengar titik kesakitan yang sama berulang kali. Penyelidik mahukan pemeriksaan produk PCR yang lebih pantas, skrin pemprosesan tinggi yang tidak terhenti, dan jalur bersih yang boleh terus ke ligasi atau pemulihan gel. Perolehan mahukan bahan habis pakai yang tahan lama dan tidak memerlukan penggantian berterusan. Di Longlight Technology, kami mengemukakan soalan mudah: bagaimana jika Elektroforesis Asid Nukleik boleh disiapkan dengan pasti dalam masa 5 – 10 minit tanpa mengorbankan prestasi hiliran?

❓ Apa yang Makmal Memberitahu Kami?

Terlalu panas, kekuatan penampan yang tidak konsisten antara pemutus dan larian, dan kebimbangan tentang langkah hiliran mengehadkan kelajuan. Pasukan teragak-agak untuk menukar penimbal kerana mereka bimbang tentang ligasi, hasil pengekstrakan atau kestabilan RNA. Anda tidak perlu memilih antara kelajuan dan kualiti.

(FiguRe 1. Penggunaan Penampan Super Fast Running pada 0.8% Agarose Gel. Lorong 1: D12000

tangga (5 μL); Lorong 2: 4 μL; Lorong 3: 3 μL; Lorong 4: 2 μL; Lorong 5: 1 μL)

(Rajah 2. Penggunaan Penampan Berjalan Pantas pada

1% Gel Agarose. Lorong 1: Tangga D5000 (5 μL); Lorong 2: 4 μL; Lorong 3: 3 μL; Lorong 4: 2 μL; Lorong 5: 1 μL)

(Rajah 3. Penggunaan Penampan Berjalan Pantas pada

2% Gel Agarose. Lorong 1: Tangga D1000 (5 μL); Lorong 2: 4 μL; Lorong 3: 3 μL; Lorong 4: 2 μL; Lorong 5: 1 μL.)

• Penampan Larian Super Pantas serasi sepenuhnya dengan pelbagai kepekatan gel agarosa (0.8%, 1%, 2%), seperti yang ditunjukkan Rajah 1–3. Tanpa mengira kepekatan gel, jalur asid nukleik mengekalkan resolusi dan kejelasan yang sangat baik, memastikan keperluan eksperimen untuk mengasingkan molekul DNA bersaiz berbeza.

Pembaikan: Penampan Berjalan Pantas Dijelaskan

Kami 50x Penampan Larian Sangat Pantas ialah formulasi kekuatan ion rendah yang dibina khusus untuk Elektroforesis Asid Nukleik agarosa. Kurang beban ionik bermakna kurang haba pada medan tertentu. Pasangkan dengan kepekatan agarose yang betul dan anda boleh beroperasi dengan yakin sehingga 25 – 30 V/cm, memampatkan larian yang selalunya mengambil masa 30 minit dalam hanya 5 – 10 minit. Dalam penggunaan head-to-head, pasukan biasanya melihat pemisahan ~2.5 – 3x lebih pantas daripada 1x TAE atau 1x TBE standard.

Bagaimana Ia Berfungsi

Kekuatan ion yang lebih rendah mengurangkan pemanasan Joule dan membantu mengekalkan jalur tajam pada voltan yang lebih tinggi. Kestabilan haba itu mengekalkan resolusi untuk DNA dan RNA sambil membolehkan kelajuan. Sama pentingnya, kimia adalah mesra hiliran: ia tidak mengganggu pengekstrakan atau ligasi gel DNA, jadi anda boleh beralih terus kepada pengklonan, pembersihan atau kuantiti.

• Pemulihan Pantas: 5 – 10 minit larian pada 25 – 30 V/cm

• Jalur Tajam: Resolusi tinggi walaupun di bawah kekuatan medan yang tinggi

• Keserasian hiliran: Tiada kesan ke atas pemulihan gel atau ligasi

• Pemulihan Lebih Tinggi: Selalunya melebihi prestasi pemulihan TAE/TBE

• Kapasiti Penampan Boleh Guna Semula: Penampan yang kuat untuk pelbagai kegunaan

• Persediaan Pantas

Cairkan penimbal 1:50 untuk menyediakan larutan kerja 1x (cth, 20 mL 50x ke dalam 980 mL air suling). Simpan 1x pada suhu bilik. Untuk konsistensi terbaik, gunakan kumpulan 1x yang sama untuk membuang dan menjalankan gel; Mencampurkan kumpulan yang berbeza boleh mengubah kekuatan penimbal pada antara muka gel. Jangan cairkan di bawah 1x – yang mengundang penghijrahan yang tidak normal.

Syarat Operasi

Jalankan pada 25 – 30 V/cm panjang gel dan laraskan berdasarkan geometri tangki dan tingkah laku haba anda. Seperti mana-mana larian medan tinggi, sahkan had bekalan kuasa anda; Jika arus atau voltan hanyut ke bawah, semak sama ada instrumen mengehadkan arus atau kuasa. Pewarnaan adalah fleksibel: tambah pewarna pada gel atau noda selepas larian – kedua-duanya berfungsi.

• Keselamatan Dan Kestabilan

Larian berterusan atau suhu ambien yang tinggi boleh meningkatkan suhu penimbal. Jika perlu, sejukkan unit atau letakkan di atas ais untuk melindungi resolusi. Gantikan penimbal secara berkala untuk mengekalkan ketepatan. Simpan kedua-dua stok 50x dan penyelesaian kerja 1x pada suhu bilik; Di bawah keadaan yang disyorkan, kestabilan sekurang-kurangnya 12 bulan dari penerimaan. Seperti biasa, pakai kot makmal dan sarung tangan pakai buang. Produk ini bertujuan untuk kegunaan penyelidikan oleh profesional.

Keuntungan Dunia Sebenar Dan Cara Bermula

Apabila kelajuan boleh dipercayai, segala-galanya di hiliran bertambah baik. Gel 5 – 10 minit membolehkan anda menyemak PCR, melaraskan persediaan perpustakaan atau mengesahkan ligasi tanpa menggagalkan hari. Untuk kumpulan pemprosesan tinggi, gel yang lebih pantas menyahsumbat baris gilir dan meningkatkan daya proses. Ini bermakna lebih banyak data sebelum makan tengah hari - dan lebih sedikit tayangan semula petang.

Di Longlight Technology, kami membina penimbal ini untuk membantu pasukan memendekkan gelung antara hipotesis dan hasil. Dalam penggunaan perintis, makmal melaporkan jalur yang lebih bersih di medan yang lebih tinggi, penyerahan yang lebih lancar kepada ligasi dan hasil pengekstrakan gel yang lebih baik berbanding dengan penampan warisan. Kebolehgunaan semula dan format 50x pekat juga menyokong kawalan kos: satu botol sangat membantu, dan kapasiti penimbal yang kuat bermakna lebih sedikit pertukaran di tengah-tengah larian.

Amalan Terbaik Untuk Elektroforesis Asid Nukleik Pantas

• Tuang dan jalankan dengan kumpulan 1x yang sama untuk konsistensi.

• Mulakan pada 25 V/cm, kemudian bergerak ke arah 30 V/cm mengikut persediaan anda.

• Tonton suhu penimbal pada urutan larian yang lebih panjang; sejukkan mengikut keperluan.

• Kekalkan voltan di bawah 200 V jika anda menjatuhkan gel tuang TAE/TBE ke dalam penimbal pantas; voltan yang sangat tinggi boleh memutarbelitkan keputusan dalam senario itu.

• Di mana ia bersinar

Larian pengesahan pendek, pemeriksaan pantas semasa pengklonan, menyaring berpuluh-puluh amplikon PCR dan mempercepatkan aliran kerja RNA yang biasanya merangkak di bawah sistem tradisional. Jika pasukan anda menghabiskan lebih banyak masa menunggu gel daripada bertindak berdasarkan keputusan, keuntungannya serta-merta.

Pemikiran Fina

Bersedia untuk mengurangkan masa Elektroforesis Asid Nukleik anda kepada 10 minit - tanpa menukar kejelasan atau pemulihan? Bercakap dengan Longlight Technology hari ini untuk meminta sampel, mendapatkan templat SOP atau menyemak keserasian untuk kotak gel anda. Mari kita tukar larian gel daripada kesesakan kepada pusat pemeriksaan pantas dan pastikan eksperimen anda bergerak.